encapsula CLD-8927說明書

Fluoroliposome®-DiA

SKU# CLD-8927

描述

有五種熒光對照脂質(zhì)體產(chǎn)品（Fluoroliposome®）用于Clodrosome®（氯膦酸鹽脂質(zhì)體）。所有五種熒光脂質(zhì)體在其膜內(nèi)摻入親脂性染料。它們不溶于水; 然而，當(dāng)摻??入膜中時(shí)，它們的熒光很容易檢測到。DiI，DiO，DiD，DiR和DiA覆蓋范圍廣泛的激發(fā)和發(fā)射波長，從300s到900s。DiI和DiO具有約65nm的熒光激發(fā)和發(fā)射大值，便于雙色標(biāo)記。DiA的發(fā)射光譜非常寬，根據(jù)所使用的濾光器，可以將其檢測為綠色，橙色或甚至紅色熒光。DiI，DiO，DiD和DiR屬于二烷基羰基青化物類化合物。二烷基羰花青的光譜性質(zhì)很大程度上與烷基鏈的長度無關(guān)。相反，它們由端子環(huán)系統(tǒng)中的雜原子和連接橋的長度決定。它們在脂質(zhì)環(huán)境中具有*的消光系數(shù)，中等的熒光量子產(chǎn)率和短的激發(fā)態(tài)壽命（約1ns）。各染料的熒光光譜如下所示。

您可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)室中使用的熒光設(shè)備和過濾器的類型選擇Fluoroliposome®。Clodronate脂質(zhì)體不能簡單地制成熒光，因?yàn)闃?biāo)記的Clodrosome®可能會產(chǎn)生不準(zhǔn)確和/或無法解釋的數(shù)據(jù)。有關(guān)更多信息，請參閱技術(shù)說明部分。

DiA的熒光激發(fā)和發(fā)射光譜。

巨噬細(xì)胞攝取含有DiA的熒光脂質(zhì)體。

技術(shù)信息

Fluoroliposome®-DIA

熒光染料	激發(fā)/發(fā)射（nm）	濃度（mg / ml）	濃度（mM）
4-（4-（二十六烷基氨基）苯乙烯基）-N-甲基吡啶碘化物（DiA）	五百九十〇分之四百五十六	0.0625	0.0794

技術(shù)說明

• 熒光Clodrosome®的問題與標(biāo)記的Clodrosome®產(chǎn)生的不準(zhǔn)確和/或無法解釋的數(shù)據(jù)的可能性有關(guān)。當(dāng)Clodrosome®誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞凋亡時(shí)，在吞噬溶酶體中被破壞和代謝的摻入Clodrosome®的熒光脂質(zhì)將分散在殘留的凋亡小體中，隨后被其他巨噬細(xì)胞吞噬。因此，可以在吞噬細(xì)胞中檢測到熒光脂質(zhì)，所述吞噬細(xì)胞從未吞噬Clodrosome，特別是當(dāng)利用FACS或熒光透視檢測熒光細(xì)胞（FACS）或組織勻漿中的熒光水平（熒光透視）時(shí)。另一種潛在的偽影來自于細(xì)胞外“垃圾”中殘留的熒光脂質(zhì)，其尚未被其他吞噬細(xì)胞清除，產(chǎn)生高背景熒光。然而，經(jīng)驗(yàn)豐富的共聚焦顯微鏡可能能夠區(qū)分由熒光完整脂質(zhì)體產(chǎn)生的點(diǎn)狀熒光與破壞脂質(zhì)體的更多彌散熒光特征，并且一些已成功使用熒光氯膦酸鹽脂質(zhì)體通過共聚焦顯微鏡觀察這些脂質(zhì)體的細(xì)胞位置體內(nèi) [1]。另一個(gè)復(fù)雜因素是公布的數(shù)據(jù)在氯膦酸鹽脂質(zhì)體開始在巨噬細(xì)胞中誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡時(shí)確切地變化很大。Mönkönnnen  等。表明巨噬細(xì)胞死亡在體外對RAW264細(xì)胞進(jìn)行氯膦酸鹽脂質(zhì)體處理后的個(gè)小時(shí)內(nèi)是可測量的[2]，而許多人報(bào)告在體內(nèi)治療后數(shù)小時(shí)內(nèi)沒有出現(xiàn)巨噬細(xì)胞凋亡的跡象。數(shù)據(jù)的可變性可能是由于氯膦酸鹽的不同脂質(zhì)體制劑以及極其不同的實(shí)驗(yàn)條件。因此，與大多數(shù)生物學(xué)研究一樣，特別是那些涉及脂質(zhì)體的研究，需要在每個(gè)實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ椭薪⒂寐褥⑺猁}脂質(zhì)體處理動物或細(xì)胞與凋亡發(fā)生之間的時(shí)間量。如果研究的性質(zhì)要求跟蹤C(jī)lodrosome®而不是對照，Encapsula可根據(jù)要求提供DiI標(biāo)記的Clodrosome®，并假設(shè)Clodrosome®分布可在凋亡發(fā)生前明確評估，清晰有效的數(shù)據(jù)關(guān)于熒光Clodrosome®的生物分布應(yīng)該是可以獲得的。但是，對于大多數(shù)用途，
• 當(dāng)在正常動物體內(nèi)監(jiān)測單核細(xì)胞攝取時(shí)，由于脂質(zhì)體吞噬作用后單核細(xì)胞的邊緣化，循環(huán)的單核細(xì)胞可能在注射后的前2小時(shí)內(nèi)“消失”或顯示減少的計(jì)數(shù)。這些細(xì)胞將在幾小時(shí)內(nèi)重新進(jìn)入血液循環(huán)。Sunderkötter  等人。證明這種現(xiàn)象并詳細(xì)討論這種行為。還要考慮循環(huán)單核細(xì)胞的壽命約為24小時(shí)，因?yàn)閱魏思?xì)胞老化，標(biāo)記的單核細(xì)胞將不斷離開循環(huán)，即使在正常動物中也是如此[3] 。
• 當(dāng)不受干擾超過幾個(gè)小時(shí)時(shí)，脂質(zhì)體可能會沉淀下來。在即將使用之前，為了確保均勻的脂質(zhì)體懸浮液，將樣品瓶緩慢倒轉(zhuǎn)數(shù)次，直到通過目視檢查使懸浮液看起來均勻。劇烈或不穩(wěn)定的搖動不會損害脂質(zhì)體，但可能引起泡沫和氣泡形成，使得更難以測量所需劑量。
• 如果進(jìn)行靜脈注射的人員沒有經(jīng)歷或熟悉注射大量（約10％動物重量，以ml計(jì)），粘性液體或微粒懸浮液的預(yù)防措施，考慮在發(fā)生嚴(yán)重注射相關(guān)不良事件的情況下可以使用額外的動物。劑量控制動物首先熟悉大量注射。
• 當(dāng)靜脈內(nèi)給藥時(shí)，使用標(biāo)準(zhǔn)預(yù)防措施向動物給藥較大劑量，包括以下內(nèi)容：a）在給藥前將產(chǎn)品加熱至室溫。b）確保在給藥前從注射器中除去所有氣泡; 靜脈注射氣泡可能會導(dǎo)致空氣栓塞，從而導(dǎo)致動物死亡或嚴(yán)重受傷。c）以不超過1毫升/分鐘的緩慢，穩(wěn)定的速度注入產(chǎn)品; 如果動物表現(xiàn)出任何非典型反應(yīng)，例如異常激動，則降低輸注速度。
• 輸注相關(guān)的不良反應(yīng)通常涉及動物喘氣以進(jìn)行空氣或其他類似癲癇發(fā)作的運(yùn)動。動物通常在沒有明顯持久性損傷的情況下恢復(fù)，但研究人員必須評估對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的任何潛在影響。
• 脂質(zhì)體應(yīng)保持在4°C，切勿冷凍。

出現(xiàn)

Fluoroliposome®-DiA是由大微米尺寸多層脂質(zhì)體制成的黃色液體懸浮液。由于它們的大尺寸，一些脂質(zhì)體可能沉淀到小瓶的底部。如果閑置在冰箱中，F(xiàn)luoroliposome®-DiA將相分離并在小瓶底部形成顆粒，在頂部留下清澈的溶液。因此，應(yīng)在使用前搖動小瓶以形成均勻的溶液。

儲存和保質(zhì)期

存儲

Fluoroliposome®產(chǎn)品應(yīng)始終在4°C??的黑暗中儲存，除非在動物給藥前短時(shí)間內(nèi)置于室溫。不要凍結(jié)。ENS不對冷凍產(chǎn)品產(chǎn)生的結(jié)果負(fù)責(zé)。

保質(zhì)期

Fluoroliposome®產(chǎn)品每天生產(chǎn)。裝運(yùn)的批次是在同一天生產(chǎn)的。建議在生產(chǎn)日期后60天內(nèi)使用產(chǎn)品。